希凱生物是Anatrace授權(quán)代理商，提供膜蛋白研究試劑：磷脂、去垢劑，生化試劑等

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膜蛋白是生物膜功能的主要執(zhí)行者，在生物體內(nèi)參與許多重要的生理過(guò)程。由于很難獲得穩(wěn)定均勻且維持膜蛋白正確構(gòu)象的膜模擬環(huán)境，膜蛋白研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于水溶性蛋白。磷脂納米盤（Nanodisc）是由高密度脂蛋白發(fā)展而來(lái)的用于膜蛋白研究的新類型膜結(jié)構(gòu)。將膜蛋白與Nanodisc組裝起來(lái)，是膜蛋白研究的有效方法。制備納米盤的一種常用方法是將苯乙烯-馬來(lái)酸(SMA)添加到完整的細(xì)胞膜上，從而自發(fā)地生成SMA-脂質(zhì)顆粒（SMALP）的納米盤。

Anatrace提供新一代 苯乙烯-馬來(lái)酸酐共聚物（SMA）系列衍生物產(chǎn)品。 

SMA-EA，Styrene Maleic Acid – Ethanol Amine copolymer, sodium salt

SMA - ED，SMA derivatized with ethylenediamine

SMAd-A，Styrene Maleimide-Amine copolymer, Dehydrated SMA Ethylenediamine copolymer

SMA-QA，Styrene Maleimide Quaternary Ammonium copolymer

對(duì)高濃度的二價(jià)陽(yáng)離子（200 mM Ca2+ 或Mg2+）表現(xiàn)出更高的穩(wěn)定性，可通過(guò)改變脂質(zhì)與聚合物的比例，允許使用各種尺寸的 Lipid Nanodiscs 。 這些產(chǎn)品已被證明可以與合成脂質(zhì)形成 Nanodiscs [1]，并直接從膜中溶解膜蛋白[2]。洗滌劑經(jīng)常干擾蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，并可能導(dǎo)致變性，因此這些新聚合物是去垢劑的絕佳替代品。其溶解方案簡(jiǎn)單明了(Figure 1)。

膜蛋白溶解方案

• 為了溶解來(lái)自天然脂雙層的膜蛋白，可以將聚合物直接添加到已在緩沖液中重懸至最終濃度為 1% – 3% 的分離膜制劑中。聚 合物可以作為SMA的粉末或原液加入到緩沖液中(新SMA聚合物的pH穩(wěn)定性見圖2;每種情況下的最佳pH值可能略有不同)。 

• 溶解在室溫或 4°C 下進(jìn)行，同時(shí)輕輕搖動(dòng)溶液。 

• 溶解在 SMA 聚合物中的膜蛋白與所有常用的蛋白質(zhì)純化技術(shù)兼容，包括 IMAC、親和、離子交換和 SEC。 

• 在 SMA 中溶解和純化的膜蛋白與大多數(shù)生物物理表征分析兼容，包括 SEC、SDS-PAGE、DLS、TEM 和 NMR 光譜。

制備 DMPC Nanodiscs方案

• 使用 DMPC (10 mg/ml) 在 pH 7.4 的 50 mM 磷酸鉀中作為儲(chǔ)備溶液制備具有不同聚合物的Nanodiscs。 聚合物原液在緩沖液中制備為10mg /ml (pH值的選擇，見圖2)。 

• 通過(guò)添加 2:1 w/w SMA-EA (10 mg/ml) 和 DMPC (10 mg/ml) 制備 SMA-EA Nanodiscs，然后在 37°C 下孵育 4 小時(shí)。 

  通過(guò)添加 1.5:1 w/w SMA-QA (10 mg/ml) 和 DMPC (10 mg/ml) 制備 SMA-QA Nanodiscs，然后在 37°C 下孵育 4 小時(shí)。 

• 可以使用體積排阻色譜法純化Nanodiscs，并且可以使用動(dòng)態(tài)光散射評(píng)估它們的尺寸。 

• 我們建議在 50 mM 磷酸鉀緩沖液 (pH 7.4) 中使用Nanodiscs溶液 (100:1 DMPC:protein) 將目標(biāo)蛋白孵育 12 小時(shí)。